Pierce™ Rapid Gold BCA 蛋白測定試劑盒

Pierce Rapid Gold BCA 蛋白測定試劑盒是一種快速、雙組分、高精度、去污劑兼容的測定法，經優化用于測定總蛋白質濃度。其采用與傳統 Pierce BCA 蛋白測定法相同的銅螯合技術，具有可比的準確度，但僅在室溫下孵育5分鐘并在 480 nm 處測量。使用這種改良方法，無需等待或將樣品暴露于高溫以快速獲得結果。

與所有可用的 BCA 蛋白測定法具有可比性?

Rapid Gold BCA 蛋白測定試劑盒的特點包括：
•吸光度 — 比色法，480 nm 處具有吸光度
•均勻性 — 蛋白間差異與傳統 BCA 蛋白測定法相似且小于染料結合蛋白測定法 (Bradford)
•兼容性 — 不受大多數離子和非離子去污劑典型濃度的影響
•測定時間 — 5分鐘室溫反應
•測定范圍 — BSA 的線性工作范圍為 20-2000 µg/mL

傳統 BCA 蛋白測定法是廣泛使用和可接受的蛋白測定法，因其高度準確的蛋白濃度測定和與蛋白研究中遇到的大多數樣品類型兼容而受到信賴。然而，使用這種傳統方案處理樣品時，必須在 37°C 下加熱反應30分鐘或室溫下孵育兩小時。快速 Gold BCA 蛋白定量試劑盒既保留了經典 BCA 的關鍵特點，又縮短了室溫孵育時間，孵育要求（時間和溫度）與染料結合法相同。快速Gold BCA 蛋白定量試劑盒可用于評估全細胞裂解物、親和純化柱分離組分的產率，以及監測工業應用中的蛋白質污染。與大多數染料結合法相比并且與傳統 BCA 測定法相似，Rapid Gold BCA 測定法受蛋白質組成差異的影響更小，蛋白間差異較小。

Rapid Gold BCA 蛋白測定法如何檢測蛋白
Rapid Gold BCA 蛋白測定法采用與傳統 BCA 蛋白測定法相同的銅還原法和獨te的銅螯合物。該測定法將在堿性介質中通過蛋白將 Cu2+ 還原為 Cu1+ 與通過專有螯合物高靈敏度和選擇性的比色檢測亞銅陽離子 (Cu1+) 相結合。步是銅與堿性環境中的蛋白質螯合，形成淺綠色復合物，這一過程被稱為雙縮脲反應。在該反應（稱為雙縮脲反應）中，含有三個或更多氨基酸殘基的肽在含酒石酸鈉鉀的堿性環境中與銅離子形成有色螯合復合物。

在顯色反應的第二步中，Rapid Gold BCA 螯合物與步形成的還原型（亞銅）陽離子反應。兩分子 BCA 與一個亞銅離子螯合，產生深金橙色反應產物。BCA/銅復合物是水溶性的，在 480 nm 處具有強線性吸光度，吸光度隨蛋白濃度增加而升高。該復合物的靈敏度（檢測下限）大約是個反應中淡綠色的100倍。

顯色反應受到蛋白氨基酸序列中四個氨基酸殘基（半胱an酸、胱an酸、酪an酸和色an酸）的強烈影響。但是，與考馬斯染料結合法不同，一般的肽基質也會影響顯色，BCA 法有助于將蛋白質組成差異造成的變異性降至zui低。

快速 Gold BCA 蛋白測定的兼容性
一些已知可干擾快速 Gold BCA 蛋白測定的物質包括潛在還原劑、螯合劑以及強酸或強堿。由于這些物質在微量濃度下就能夠干擾蛋白質濃度估算，因此，應避免使用以下物質作為樣品緩沖液的組分：
•抗壞血酸
• EGTA
• 鐵
• 不純蔗糖
• 兒茶酚胺
• 不純甘油
• 脂質
• 色an酸
• 肌酐
• 過氧化氫
• 密二糖
• 酪an酸
• 半胱an酸
• 酰肼類
• 酚紅
• 尿酸

Pierce™ Rapid Gold BCA 蛋白測定試劑盒