化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)是現(xiàn)代微量分析方法之一，由于其靈敏度高(可達(dá)10-18mol)、簡便快速(計數(shù)1秒/管)、線性好(可兩點校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線)、有效期長(可達(dá)1年)、安全無害(無放射性和致畸物污染)等優(yōu)點而成為取代放免和酶聯(lián)的重要技術(shù)。

　　

　　辣根過氧化酶使試劑中的發(fā)光物（luminol）氧化并發(fā)光，而試劑中含有增強劑這使得發(fā)光增強了1000倍。在免疫印跡中，將復(fù)雜的蛋白混合物經(jīng)sds-page分離，并轉(zhuǎn)移到固相膜上（如nc、pvdf）等，用于免疫學(xué)檢測，經(jīng)HRP標(biāo)記的抗體與膜上的蛋白直接（標(biāo)記一抗）或間接（標(biāo)記二抗）反應(yīng)。

　　

　　在如今的Westernblot實驗中，化學(xué)發(fā)光檢測是常用的檢測方法。相對于顯色檢測和熒光檢測而言，它的靈敏度非常高，可達(dá)到飛克級（fg）。自從增強型化學(xué)發(fā)光（ECL）檢測問世以來，這種方法就受到了*科研工作者的喜愛。

　　

　　化學(xué)發(fā)光檢測通常使用的是辣根過氧化物酶（HRP）。它催化底物魯米諾（luminol）的氧化，同時生成光信號。這些信號可通過X光膠片的曝光來檢測，或直接在與化學(xué)發(fā)光兼容的CCD成像系統(tǒng)上獲取圖像。當(dāng)然，后一種方式更方便，也更流行。

　　

　　用途：

　　

　　該底物試劑與堿性磷酸酶（ALP）混合后，堿性磷酸酶磷酸根水解后，底物立即發(fā)生分解反應(yīng)釋放出光子，在特定的堿性磷酸酶濃度范圍內(nèi)，釋放的光子數(shù)量與溶液中堿性磷酸酶的濃度成正比，所以可以用于堿性磷酸酶的定量檢測。

　　

　　應(yīng)用領(lǐng)域：

　　

　　1堿性磷酸酶發(fā)光檢測；

　　

　　2.ELISA化學(xué)發(fā)光檢測；

　　

　　3.WB化學(xué)發(fā)光檢測；

　　

　　4.其他酶聯(lián)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)檢測。